Neutralización del virus SARS-CoV-2 (linaje B.1.1) por suero hiperinmune de llama (Lama glama) en cultivo de células Vero / Neutralization of SARS-CoV-2 (lineage B.1.1) by hyperimmune llama (Lama glama) serum in Vero cell culture

Objetivo. Evaluar la respuesta serológica de anticuerpos de una llama (Lama glama) a la inmunización del virus SARS-CoV-2 (linaje B.1.1) y la capacidad neutralizante del suero de llama hiperinmune frente al virus SARS-CoV-2 (linaje B.1.1) en células Vero. Materiales y métodos. Se inmunizó una llama con el virus SARS-CoV-2 inactivado (Linaje B.1.1) y se analizaron muestras de suero para evaluar el nivel de anticuerpos mediante ELISA, así como la reactividad a antígenos de SARS-CoV-2 mediante Western Blot. Además, se evaluó la neutralización viral en cultivos celulares por la Prueba de Neutralización por Reducción de Placas (PRNT, por sus siglas en inglés). Resultados. Se observó un aumento en la serorreactividad en la llama inmunizada desde la semana 4 en adelante. Los títulos de anticuerpos fueron más elevados en el séptimo refuerzo de inmunización. Los resultados de Western Blot confirmaron los hallazgos positivos del ELISA, y los anticuerpos del suero inmune reconocieron varias proteínas virales. El ensayo de neutralización (PRNT) mostró una neutralización viral visible, concordante con los resultados de ELISA y Western Blot. Conclusiones. Los hallazgos sugieren que el suero hiperinmune de llama podría constituir una fuente de anticuerpos terapéuticos contra las infecciones por el virus SARS-CoV-2 (linaje B.1.1) y que deberá ser evaluado en estudios posteriores.

Objective. To evaluate the serological antibody response of a llama (Lama glama) to SARS-CoV-2 (B.1.1 lineage) immunization and the neutralizing capacity of hyperimmune llama serum against SARS-CoV-2 virus (B.1.1 lineage) in Vero cells. Materials and methods. A llama was immunized with inactivated SARS-CoV-2 (B.1.1 lineage). Serum samples were analyzed to evaluate the level of antibodies by ELISA, as well as reactivity to SARS-CoV-2 antigens by Western Blot. In addition, viral neutralization in cell cultures was assessed by the Plate Reduction Neutralization Test (PRNT). Results . Seroreactivity increased in the immunized llama from week 4 onwards. Antibody titers were the highest after the seventh immunization booster. Western blot results confirmed the positive ELISA findings, and immune serum antibodies recognized several viral proteins. The neutralization assay (PRNT) showed visible viral neutralization, which was in accordance with the ELISA and Western Blot results. Conclusions. The findings suggest that hyperimmune llama serum could constitute a source of therapeutic antibodies against SARS-CoV-2 infections (lineage B.1.1), and should be studied in further research.

Caracterización molecular de enterobacterias multirresistentes en dos departamentos de la selva peruana / Molecular characterization of multiresistant enterobacteria in two departments of the Peruvian jungle

Resumen | Introducción. La aparición de enterobacterias multirresistentes y productoras de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) en pacientes de consulta externa con infecciones urinarias, representa un problema de salud pública en Perú. Objetivos. Caracterizar molecularmente enterobacterias multirresistentes aisladas de pacientes con diagnóstico de infección urinaria y procedentes de dos departamentos de la selva peruana. Materiales y métodos. Se hizo un estudio descriptivo, observacional y retrospectivo de 61 aislamientos de urocultivo procedentes de la selva peruana durante 2017 y 2018. Los perfiles de resistencia se identificaron utilizando el sistema automatizado MicroScan™ y para la detección de los genes blaTEM, blaCTX-M, blaSHV se empleó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional. Resultados. Las enterobacterias positivas para BLEE más frecuentes por departamento fueron Escherichia coli en Madre de Dios (25 %, 10/40) y Ucayali (76,2 %, 16/21). En ambos departamentos, el gen blaCTX-Mfue el más frecuente (25/61; 41 %), seguido por blaTEM(15/61; 24,6 %) y blaSHV (10/61; 16,4 %). En el perfil de sensibilidad antimicrobiana, se detectó 72,6 % de resistencia contra ampicilina, 82,3 % contra cefalotina y 88,7 % contra nitrofurantoína. Conclusiones. El porcentaje de cepas de enterobacterias multirresistentes productoras de BLEE en ambos departamentos fue del 57,4 % y el gen bla CTX-M fue el más frecuente.

Abstract | Introduction. The emergence of multiresistant enterobacteria producing extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) in outpatients with urinary tract infections represents a public health problem in Perú. Objectives. To characterize multiresistant enterobacteria isolated from patients diagnosed with urinary tract infection in two Peruvian jungle departments using molecular techniques. Materials and methods. We conducted a descriptive, observational, and retrospective study of 61 urine culture isolates from two departments in the Peruvian jungle during 2017-2018. Resistance profiles were identified using the MicroScan™ automated system and a conventional polymerase chain reaction (PCR) was used for the detection of blaCTX-M, blaTEMand blaSHV genes. Results. The most common positive ESBL enterobacteria for each department were Escherichia coli in Madre de Dios (10/40; 25%) and Ucayali (16/21; 76.2%). Gene blaCTX-Mwas the most prevalent in both departments (25/61; 41%), followed by blaTEM (15/61; 24.6%), and blaSHV (10/61; 16.4%). As for the antimicrobial susceptibility profile, we detected resistance levels of 72.6% for ampicillin, 82.3% for cephalothin, and 88.7% for nitrofurantoin. Conclusions. BLEE-producing multi-resistant enterobacteria strains in both departments were 57.4% and blaCTX-M was the most common gene.

Efluentes hospitalarios como reservorio de enterobacterias productoras de betalactamasas y carbapenemasas

Con el objetivo de determinar la presencia de enterobacterias productoras de betalactamasas (bla) en muestras de efluentes hospitalarios, se realizó un estudio en dos hospitales de nivel II y III de Lima, Perú. Se identificó y caracterizó el perfil de resistencia de las bacterias aisladas mediante el sistema MicroScan para 18 antimicrobianos, y mediante PCR convencional se determinó la presencia de los genes de resistencia a betalactamasas de espectro de extendido (BLEE) (bla CTX-M, bla SHV, bla TEM, bla PER) y carbapenemasas (bla KPC , bla NDM , bla VIM , bla IMP). Se identificaron 32 aislados (20 enterobacterias y 12 bacterias gramnegativas). Todas las bacterias aisladas presentaron multirresistencia. Se halló la presencia de genes BLEE (bla TEM) y carbapenemasas (bla KPC y bla IMP) en los hospitales evaluados. La liberación de estos microorganismos a la vía pública y la falta de tratamiento de los efluentes hospitalarios podría ser un importante problema de salud pública.

The aim of this study was to determine the presence of beta-lactamase- (bla) producing Enterobacteriaceae in hospital effluent samples from two level II and III hospitals in Lima, Peru. The resistance profile of the isolated bacteria was identified and characterized using the MicroScan system for 18 antimicrobials, and the presence of extended spectrum beta-lactamases (ESBL) (blaCTX-M ,bla SHV bla TEM ,bla PER) and carbapenemases (bla KPC ,bla NDM ,bla VIM ,bla IMP) resistance genes was determined by conventional PCR. Thirty-two isolates were identified (20 Enterobacteriaceae and 12 gram-negative bacteria). All the isolated bacteria showed multidrug resistance. ESBL (bla TEM) and carbapenemase (blaKPC, blaIMP) genes were found in samples from the hospitals that we evaluated. The release of these microorganisms to public areas and the lack of treatment of the hospital effluents could be an important public health problem.

Neutralización de la actividad letal del veneno de serpiente Bothrops atrox por suero hiperinmune de llama (Lama glama) / Neutralization of the lethal activity from Bothrops atrox venom by hyperimune llama serum (Lama glama)

RESUMEN Objetivos: Evaluar la capacidad del suero hiperinmune de llama (Lama glama) para neutralizar la letalidad del veneno de la serpiente Bothrops atrox en ratones de laboratorio. Materiales y métodos: Se calculó la dosis letal media (DL50) de un pool de venenos de serpientes de Bothrops atrox de Perú, y se midieron los títulos de anticuerpos por ensayo ELISA; así como la potencia de neutralización del suero inmune por el cálculo de la dosis efectiva media (DE50) durante el periodo de inmunización. Resultados: La DL50 del veneno fue de 3,96 µg/g, similar a otros trabajos realizados en Bothrops atrox en Perú. Los títulos de anticuerpos contra el veneno se incrementan rápidamente en la llama mostrando una rápida respuesta inmune; sin embargo, la capacidad de neutralización se incrementa más lentamente y requiere de varias dosis y refuerzos de las inmunizaciones alcanzado una DE50 de 3,30 µL/g ratón y una potencia de neutralización 3,6 mg/mL después de 15 inmunizaciones. Conclusiones: El suero hiperinmune de llama es capaz de neutralizar la letalidad del veneno de la serpiente Bothrops atrox de Perú en ratones de laboratorio.

ABSTRACT Objectives: To evaluate the capacity of the hyperimmune llama serum (Lama glama) to neutralize the lethal activity of Bothrops atrox venom in laboratory mice. Materials and methods: Mean lethal dose (LD50) was calculated from a Bothrops atrox venom sample pool from Peru. The antibody titers were measured by ELISA assay; and the immune serum neutralization potency was measured by calculating the mean effective dose (ED50) during the immunization period. Results: The venom's LD50 was 3.96 μg/g; similar to what was found in other studies about Bothrops atrox carried out in Peru. The titers of antibodies against the venom increased rapidly in the llama, demonstrating a fast immune response; however, the neutralization capacity increased slowly and required several doses and immunization reinforcements, obtaining a ED50 of 3.30 μL/g mouse and a neutralization potency of 3.6 mg/mL after 15 immunizations. Conclusions: The hyperimmune llama serum is able to neutralize the lethality of the Bothrops atrox venom from Peru in laboratory mice.

Comparación de los perfiles de resistencia antimicrobiana de Escherichia coli uropatógena e incidencia de la producción de betalactamasas de espectro extendido en tres establecimientos privados de salud de Perú / Comparison of Escherichia coli antibiotic-resistance profiles and incidence of beta- lactamase phenotypes in three private health facilities in Perú

Introducción. La aparición de enterobacterias multirresistentes y productoras de betalactamasas de espectro extendido en pacientes ambulatorios con infecciones urinarias representa un problema de salud pública en Perú. Objetivo. Comparar los perfiles de resistencia de Escherichia coli uropatógenas e identificar los fenotipos de cepas productoras de betalactamasas de espectro extendido en tres establecimientos privados de salud localizados en las regiones de la costa, la sierra y la selva de Perú. Materiales y métodos. Se llevó a cabo durante el 2016 un estudio descriptivo de 98 muestras de orina de pacientes con infección urinaria, 35 procedentes de Lima (costa), 38 de Juliaca (sierra) y 25 de Iquitos (selva), en el que se determinó la sensibilidad antimicrobiana utilizando ocho discos antibióticos. Asimismo, se evaluó la producción de betalactamasas de espectro extendido con discos de cefotaxima, de ceftazidima o de su combinación, con ácido clavulánico en agar Mueller-Hinton. Resultados. Se identificaron 18 perfiles de resistencia que incluían desde los sensibles a todos los antibióticos hasta los resistentes simultáneamente a siete antibióticos, con el 18,4 % de aislamientos resistentes a un antibiótico y el 54,0 % de multirresistentes. Se detectó producción de betalactamasas en el 28,6 % de las cepas procedentes de la región de Puno. También, se observó un mayor número de casos en el rango de edad de 31 a 45 años con resistencia a ceftazidima, ceftriaxona, gentamicina y trimetoprim-sulfametoxazol en el establecimiento de salud de Puno. Conclusión. Los perfiles de resistencia variaron según la localización geográfica del establecimiento de salud, observándose mayor resistencia a los antibióticos en la región de la sierra de Perú, con el 28,6 % de cepas productoras de betalactamasas de espectro extendido.

Introduction: The appearance of multidrug-resistant and beta-lactamase producing enterobacteria in outpatient care facilities represent a public health problem in Perú. Objective: To compare the resistance profiles of uropathogenic Escherichia coli and to identify extended-spectrum beta-lactamase-producing phenotypes in three private health facilities located in the Peruvian coast, Andean and jungle regions. Materials and methods: We conducted a descriptive study on 98 urine samples from Lima (coast), Juliaca (Andean region) and Iquitos (jungle region) during 2016. We determined the antimicrobial susceptibility in 35 samples from Lima, 38 from Juliaca and 25 from Iquitos using eight antibiotic disks in samples from patients diagnosed with urinary infection. We also evaluated the production of extended-spectrum beta-lactamases with cefotaxime and ceftazidime disks and a combination of both with clavulanic acid on Mueller-Hinton agar. Results: We identified 18 resistance profiles ranging from those sensitive to others simultaneously resistant to seven antibiotics: 18.4% resistant to one and 54.0% to multiple antibiotics. We detected beta-lactamase production in 28.6% of the strains from the Puno region. Likewise, we observed a greater number of cases with resistance to ceftazidime, ceftriaxone, gentamicin, and trimethoprim-sulfamethoxazole in Puno's health facility in patients within the 31 to 45 year age range. Conclusion: Resistance profiles varied according to the geographical location of the health facilities under study. Resistance to antibiotics was higher in the Andean region with 28.6% of strains producing extended-spectrum beta-lactamases.

Prueba molecular genotype MTBDRplus, una alternativa para la detección rápida de tuberculosis multidrogorresistente / Molecular test genotype MTBDRplus, an alternative to rapid detection of multidrug resistance tuberculosis

La prueba molecular Genotype MTBDRplus, es un método que permite identificar las mutaciones más frecuentes asociadas con la resistencia a las drogas antituberculosas de primera línea: isoniacida (INH) y rifampicina (RIF). El objetivo de este estudio fue evaluar el desempeño de la prueba molecular con cultivos y muestras de esputo con baciloscopía positiva. Se evaluó 95 cultivos y 100 esputos con perfiles de resistencia previamente determinados por el método de referencia “proporciones agar en placa” (APP). La prueba molecular a partir de cultivos mostró una sensibilidad de 100 por ciento;97,5 por ciento y 96,9 por ciento para RIF, INH y multidrogorresistente (MDR) respectivamente; mientras que para esputo la sensibilidadfue de 95,7 por ciento; 96,8 por ciento y 95,2 por ciento para RIF, INH y MDR respectivamente. Se concluye que Genotype MTBDRplus es una herramienta muy útil para la detección rápida de la resistencia a INH y RIF simultáneamente (MDR) en un máximo de72 h a partir de esputo o de cultivo

Importancia de la RT-PCR Cualitativa en la evidencia directa de la viremia activa del virus de la hepatitis C / Importance of the Qualitative RT-PCR in the direct evidence of viremia activates of the virus of hepatitis C

El virus de la Hepatitis C (VHC), asociado a cronicidad y a carcinoma hepatocelular (CHC), es la mayor causa de hepatitis parenteral no-A, no-B. La infección por VHC es usualmente diagnosticada por pruebas que detectan anticuerpos circulantes para antígenos VHC, reflejando la respuesta inmune sin indicar la viremia activa. Objetivo: detectar viremia activa del VHC, en individuos con o sin antecedentes de exposición a factores de riesgo conocidos (EFRC), empleando la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa (RT-PCRc). Material y Método: se estudiaron seis muestras de sangre periférica, de individuos con EFRC y 6 sin EFRC. Se extrajo ARN de cada muestra la cual fue sometida a síntesis de ADNc y posterior amplificación in vitro de un segmento génico viral-VHC con RT-PCRc. Resultado: En 5/6 (83.3 por ciento) casos con EFRC se detectó viremia, 2/5 de ellos fueron sero-negativos. En 2/6 (33.3 por ciento) casos sero negativos sin EFRC la RT-PCRc fue positiva para ARN - VHC. Conclusión: la sensibilidad de la prueba molecular cualitativa nos permitió detectar en individuos sero-positivos y sero-negativos con EFRC a aquellos con viremia activa e identificar en aquellos sin EFRC y serología negativa a individuos con infección oculta, portadores asintomáticos, aparentemente sanos.

Prevalencia del ADN del virus Epstein Barr en linfoma orbitario primario en Perú / Prevalence of the DNA of the virus Epstein primary Barr in primary orbital lynphoma in Peru

La infección por el virus de Epstein Barr (VEB) ha sido recientemente reportada en numerosas manifestaciones oculares y/o procesos inflamatorios sistémicos, incluyendo tumores oculares. Tejidos incluidos en parafina de 23 casos de linfoma orbitario primario (LOP) fueron investigados para el ADN-VEB empleando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La expresión génica del VEB se determinó por hibridación in situ para la región EBER1. En el 73 por ciento de (16/22) casos se detectó la presencia del genoma del VEB por PCR; 16/16 (100 por ciento) correspondieron al VEB tipo 1 y uno de ellos (6.3 por ciento) albergó además el tipo 2 simultáneamente. EBER-1 fue detectado por hibridación in situ (HIS) en el 37.5 por ciento de los casos positivos al ADN-VEB. Nuestros hallazgos sugieren que la frecuencia con la cual fue detectado el VEB en linfoma orbitario primario en pacientes peruanos eleva la posibilidad del rol oncogénico viral en su patogénesis.